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腫瘤細胞培養實驗報告

(一) 實驗目的、
1) 學習細胞傳代知識
2) 掌握細胞傳代
3) 進行細胞傳代
 
(二) 方法與材料、
8 s# [& n3 i7 }5 d, R; u1. 所用細胞:卵巢癌細胞HO-8910  HO-8910PM 4 Y, z8 k/
2. 試劑:0.25%胰酶、1640培養基(含10%小牛血清) ) e1 C1
3. 儀器和器材:倒置顯微鏡,培養箱、培養瓶、吸管、廢液缸等
 
(三) 步驟、
1. 吸除培養瓶內舊培養液。
2. 向瓶內加入胰蛋白酶和EDTA混合液少許,以能覆滿瓶底為限。
3. 置溫箱中2~5分鐘,當發現細胞質回縮,細胞間隙增大后,立即終止消化。
4. 吸除消化液,向瓶內注入培養液數毫升,輕輕轉動培養瓶,把殘余消化液沖掉。注意加培養液沖洗細胞時,動作要輕,以免把已     松動的細胞沖掉流失。
5. 用吸管吸取營養液輕輕反復吹打瓶壁細胞,使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。
6. 把細胞懸液吸取部分裝入新培養瓶中,置溫箱中培養。
細胞培養的一般過程
準備工作
  準備工作的內容包括器皿的清洗、干燥與消毒,培養基與其他試劑的配制、分裝及滅菌,無菌室或超凈臺的清潔與消毒,培養箱及其他儀器的檢查與調試等;
取材;
在無菌環境下從機體取出某種組織細胞(視實驗目的而定),經過一定的處理(如消化分散細胞、分離等)后接入培養器血中,這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的**培養稱為原代培養。理論上講各種動物和人體內的所有組織都可以用于培養,實際上幼體組織(尤其是胚胎組織)比成年個體的組織容易培養,分化程度低的組織比分化高的容易培養,腫瘤組織比正常組織容易培養。取材后應立即處理,盡快培養,因故不能馬上培養時,可將組織塊切成黃豆般大的小塊,置4℃的培養液中保存。取組織時應嚴格保持無菌,同時也要避免接觸其他的有害物質。取病理組織和皮膚及消化道上皮細胞時容易帶菌,為減少污染可用抗菌素處理。
培養%
將取得的組織細胞接入培養瓶或培養板中的過程稱為培養。如系組織塊培養,則直接將組織塊接入培養器皿底部,幾個小時后組織塊可貼牢在底部,再加入培養基。如系細胞培養,一般應在接入培養器皿之前進行細胞計數,按要求以一定的量(以每毫升細胞數表示)接入培養器皿并直接加入培養基。細胞進入培養器皿后,立即放入培養箱中,使細胞盡早進入生長狀態。
正在培養中的細胞應每隔一定時間觀察一次,觀察的內容包括細胞是否生長良好,形態是否正常,有無污染,培養基的PH 是否太酸或太堿(由酚紅指示劑指示),此外對培養溫度和CO2 濃度也要定時檢查。
一般原代培養進入培養后有一段潛伏期(數小時到數十天不等),在潛伏期細胞一般不分裂,但可貼壁和游走。過了潛伏期后細胞進入旺盛的分裂生長期。細胞長滿瓶底后要進行傳代培養,將一瓶中的細胞消化懸浮后分**兩到三瓶繼續培養。每傳代一次稱為“一代”。二倍體細胞一般只能傳幾十代,而轉化細胞系或細胞株則可無限地傳代下去。轉化細胞可能具有惡性性質,也可能僅有不死性(Immortality)而無惡性。培養正在生長中的細胞是進行各種生物醫學實驗的良好材料。
凍存及復蘇;
為了保存細胞,特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株,要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度-196℃,將細胞收集**凍存管中加入含保護劑(一般為二甲亞砜或甘油)的培養基,以一定的冷卻速度凍存,**終保存于液氮中。在極低的溫度下,細胞保存的時間幾乎是無限的。
復蘇一般采用快融方法,即從液氮中取出凍存管后,立即放入37℃水中,使之在一分鐘內迅速融解。然后將細胞轉入培養器皿中進行培養。
凍存過程中保護劑的選用、細胞密度、降溫速度及復蘇時溫度、融化速度等都對細胞活力有影響。
 
(四) 結果、
細胞傳代培養照片如下:
 
圖 一:放大100倍下細胞照片
 
 
 
圖 二 :放大200倍下細胞照片
(五) 總結
 這次實驗讓我們熟悉了無菌操作和傳代培養的方法和步驟,也熟悉了各種實驗儀器的使用。**次作細胞實驗,對各種方法和步驟都不熟悉,但是在老師的指導下**后實驗基本成功,也看到了自己傳代的癌細胞,還是欣慰的。
 

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