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DF-1細胞的傳代培養(yǎng)和保存

(一) 材料
DMEM細胞培養(yǎng)液10%的DMEM細胞培養(yǎng)液,含10%胎牛血清。
培養(yǎng)溫度: 39.0°C; (**大. 40.0 °C, **小 . 38.0°C)
胰酶-EDTA消化液:0.25% (w/v) 胰酶- 0.53 mM EDTA 溶液。
(二) 方法
1. 棄掉細胞培養(yǎng)液。
2. 用胰酶-EDTA消化液沖洗細胞單層,除掉殘余的細胞培養(yǎng)液。
3. 向細胞瓶內(nèi)加入 2.0 到 3.0 ml的胰酶-EDTA消化液,在倒置顯微鏡下觀察細胞直到細胞單層分散開來(一般5-15分鐘)。
注意: 消化細胞時禁止劇烈拍打或搖晃細胞瓶,不易消化的細胞可以放到39°C助消化。 
4. 加入6.0 到8.0 ml 的DMEM 培養(yǎng)基**細胞瓶,輕輕吹吸混勻消化細胞。
5. 取出部分細胞加入到新的細胞瓶中培養(yǎng)。
6. 在 39°C培養(yǎng)。
傳代率:一般推薦 1:2 到 1:10傳代。注:1:2指一瓶傳兩瓶。
(三)保存: 10%CS的DMEM細胞培養(yǎng)液加入5% DMSO。
保存溫度: 液氮保存
 
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