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Transwell細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)計(jì)

實(shí)驗(yàn)一:探究共培養(yǎng)條件分泌組是否有變化即細(xì)胞A和細(xì)胞B在共培養(yǎng)條件下其各自分泌組是否受到影響(暫且不討論誰(shuí)對(duì)誰(shuí)的影響)。
設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn):
1.使用Transwell培養(yǎng)技術(shù),上層培養(yǎng)細(xì)胞A(細(xì)胞數(shù)設(shè)置為1*10^5個(gè) <舉例>)下層培養(yǎng)細(xì)胞B(細(xì)胞數(shù)設(shè)置為2*10^5個(gè) <舉例>)共培養(yǎng)h小時(shí),從培養(yǎng)液中提取分泌蛋白(記為蛋白ⅰ)。

Transwell  1
2.相同培養(yǎng)條件 (培養(yǎng)基含量,細(xì)胞數(shù),培養(yǎng)時(shí)間,溫度等)設(shè)置兩個(gè)Transwell:⑴上層培養(yǎng)細(xì)胞A(細(xì)胞數(shù)設(shè)置為1*10^5個(gè) <舉例>)下層不放置細(xì)胞,⑵上層不放置細(xì)胞,下層培養(yǎng)細(xì)胞B(細(xì)胞數(shù)設(shè)置為2*10^5個(gè) <舉例>),培養(yǎng)h小時(shí),從培養(yǎng)液中提取分泌蛋白(記為蛋白ⅱ)。

Transwell 2-⑴                Transwell 2-⑵
3.質(zhì)譜分析蛋白ⅰ和蛋白ⅱ的差別,初步分析共培養(yǎng)條件下分泌組是否影響。
4.置換細(xì)胞A ,細(xì)胞B培養(yǎng)的上下層條件,相同方法培養(yǎng)細(xì)胞,打質(zhì)譜分析蛋白,分析結(jié)果是否與實(shí)驗(yàn)一有差別,進(jìn)一步分析原因。

總結(jié):該方法盡可能的同一了共培養(yǎng)和單獨(dú)培養(yǎng)的差異,即排除了其他影響條件,只對(duì)比在共培養(yǎng)和單獨(dú)培養(yǎng)條件下分泌組的變化 ,從而為得到可信數(shù)據(jù)提供了條件,對(duì)照分析了在共培養(yǎng)條件下與單獨(dú)培養(yǎng)條件下分泌組的變化情況。缺點(diǎn):由于細(xì)胞均未標(biāo)記,即便結(jié)果顯示共培養(yǎng)和單獨(dú)培養(yǎng)分泌組確實(shí)有變化,仍無(wú)法得出兩種細(xì)胞誰(shuí)影響誰(shuí),由此,可利用標(biāo)記培養(yǎng)基的方法,繼續(xù)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)二:優(yōu)化設(shè)計(jì),將單獨(dú)培養(yǎng)的細(xì)胞A培養(yǎng)基用Leud-d3 標(biāo)記,細(xì)胞B用Lys-C13 標(biāo)記,而對(duì)共同培養(yǎng)的Transwell不做任何標(biāo)記。如圖所示:
 
Transwell 1
 
Transwell 2-⑴                  Transwell 2-⑵
同實(shí)驗(yàn)一,經(jīng)過(guò)相同條件的培養(yǎng),提取分泌組,質(zhì)譜分析(另做A  B細(xì)胞上下層交換的實(shí)驗(yàn)),對(duì)比單獨(dú)培養(yǎng)并分別標(biāo)記與共培養(yǎng)但不標(biāo)記條件下分泌組的變化,從而得到兩種細(xì)胞在共培養(yǎng)條件下是否影響彼此分泌組的變化,并且可以得出是誰(shuí)影響誰(shuí),還是兩種細(xì)胞都有影響。 
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