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細胞培養三不要

養細胞是醫學研究生的基本功。我養過骨髓MSC、心肌細胞、心肌成纖維細胞、AD293腺病毒包裝細胞、PA317逆轉錄病毒包裝細胞。養得**多的是MSC。有三個小經驗和大家分享一下:

1. 不要燒瓶口。大多數人都喜歡在酒精燈的火焰上關瓶子,覺得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養基怎么越用越發紫的困惑?知道為什么嗎?燒瓶口燒的。培養基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時候,熾熱的空氣進入瓶內。塞緊塞子放入冰箱后,空氣變冷,壓力驟降,培養基中的碳酸就會轉化成二氧化碳,釋放出來。培養基中的碳酸少了,當然會變堿。如果不燒瓶口的話,你會發現培養液變堿的速度會大大減慢。(當然多多少少還是會有一點越用越堿,因為室溫還是比冰箱內的溫度高)

其實燒瓶口防止污染純粹是心理安慰。不妨試一下把手指在火上晃幾下,你會發現根本就不會燒疼。如果有細菌的話,這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細菌,除非把瓶口和塞子燒紅。我在G內從來就不燒瓶口。來美G以后發現這里更徹底,超凈臺內根本就不點酒精燈。

2. 不要頻繁看細胞。對于初學者而言,養細胞就像養孩子一樣,有空就要去看看。細胞越是養不好,就越是經常去看。實際上看細胞對細胞的生長沒有任何好處,特別是對原代細胞或是免疫磁珠分選后,密度特別低的細胞。培養基中的生長因子是非常有限的。細胞好不容易自分泌一點兒促生長的因子在其周圍,形成有利于生長的局部環境。你跑去看細胞,培養瓶這么一晃,把因子都給晃散了。經常可以看到新手**到晚都在看細胞,細胞老是長不好。老手細胞一扔好幾天不管,細胞瘋長。

3. 不要怕消化。在傳代的時候,初學者往往生怕細胞消化過度,早早地終止消化。細胞沒下來就使勁吹燈,吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來,用力吹打對細胞的損傷比消化更大。我師兄在做血管平滑肌原代的時候,37度消化過夜,細胞也沒事。我一般是等細胞完全變圓后才中止消化。細胞輕輕一晃就能下來。還有,動作要輕柔,盡量不要產生氣泡。氣泡在破裂時的機械應力相當大,對細胞的傷害也是很大的。
 
 
 
1. 不要燒瓶口?

燒瓶口不僅僅是為了燒掉細菌,他的意義還有瓶口溫度升高,使瓶子內形成向上的氣流,防止細菌隨空氣流進瓶子內,還有弄干瓶口(殘留在瓶口附近的培養液容易引起細菌繁殖-污染)

2. 不要頻繁看細胞?

我不是很清楚,一般來說,血清里面不是有生長因子嗎?而且,他的影響應該大于細胞自身分泌的因子。

3. 不要怕消化?

這個和細胞的類型關系非常大。很多細胞非常脆弱,很怕消化的。
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